エクソソーム(EV)分析の一例として、細胞培養上清からのEV調製過程を、ポリマー系水系SEC(GFC)用カラムOHpak SB-806 HQと種々の検出器の組み合わせにより追跡しました。 UV 280 nmは培養由来不純物全般、蛍光Ex 280 nm / Em 348 nmは主にタンパク質(Trp残基を指標とする)、またMALS散乱光(LS)は特にナノ粒子クラスの大型の対象に高感度なレスポンスを与えます。またMALSからは対象のRMS(慣性回転半径)の推定値が得られます。 EVを主成分とする画分は、多くの培養由来不純物成分と分離し、8分付近に見られました。UVや蛍光は、精製過程の進捗・効果の把握や精製物のプロファイリングに重要な知見を与える一方、大部分が脂質膜で構成され、微量のタンパク質・核酸カーゴを内包するEVに対しては感度が低く、特に精製初期においてはLSが有効なEV追跡手段となることがわかります。 SB-806 HQは、EVクラスのナノスケールの対象を保持・分離させるのに十分なポアサイズを有する、バイオプロダクトに好適な高性能水系SEC(GFC)用カラムです。多様な検出器との組み合わせにより、複雑になりがちなバイオナノターゲットの調製過程の包括的な解析に威力を発揮します。

EV画分調製条件
(1) 濃縮工程： 市販遠心限外ろ過膜 100 kDa (40倍濃縮)
(2) アフィニティ工程： 市販アフィニティ精製キット (10倍濃縮相当)
試料調製協力, 昭和電工マテリアルズ株式会社


Sample :
1. Cell culture supernatant 50 μL inj.
2. Concentrate 50 μL inj.
3. Crude product 15 μL inj.

Column       : Shodex OHpak SB-806 HQ (8.0 mm I.D. x 300 mm)　
Eluent       : PBS (-) 
Flow rate    : 1.0 mL/min
Detector     : UV (280 nm) 
               Fluorescence (Ex.280 nm, Em.348 nm)
               MALS (DAWN8+ produced by Wyatt Technology Corp.)
Column temp. : 25 ℃