医薬品添加物規格2018の精製ステビア抽出物の定量法では、カラムの選定としてアミノプロピルシリル化シリカゲルが充てんされたカラムを使用し、ステビオサイドの保持時間が10分付近になるように流量を調整すると記載されています。システム適合性は、ルブソサイド、ズルコサイドA、ステビオサイド、レバウディオサイドC、レバウディオサイドAの順に溶出し、ステビオサイドとレバウディオサイドCの分離が1.5以上であること、システムの再現性は、ステビオサイド標準溶液20 µLにつき、6回繰り返し再現性でのピーク面積の相対標準偏差が1.5 ％以下と定められています。ポリマー系アミノカラムであるHILICpak VG-50 4Eは、システム適合性および再現性の要件を満たすだけでなく、シリカ系アミノカラムよりも流量設定が半分以下となるため、使用溶媒量を1/2以下にすることが可能です。また、ポリマー系アミノカラムはシリカ系アミノカラムよりも耐久性が高いという利点もあり、VG-50 4Eは本分析に好適です。


Standard solution
Sample: 20 µL
1. Rubusoside  0.003 %
2. Dulcoside A  0.003 %
3. Stevioside  0.01 %
4. Rebaudioside C  0.003 %
5. Rebaudioside A  0.005 %

Stevioside standard solution
Sample: 20 µL
3. Stevioside  0.05 %

Column       : Shodex HILICpak VG-50 4E (4.6 mm I.D. x 250 mm)
Eluent       : H2O/CH3CN=20/80
Flow rate    : 0.65 mL/min
Detector     : UV (213 nm)
Column temp. : 35 ℃