使用HILICpak VN-50 2D对合成的寡脱氧核苷酸62mer的未纯化产物进行HPLC分析。在此分析条件下,样品以聚合度由低到高的顺序洗脱,可以分离至约30mer的低聚核酸。通常,在核酸分析中经常使用离子对反相模式和离子交换模式,但是存在离子对试剂在设备中残留的问题,并且离子交换模式需要高浓度的盐用于洗脱,因此这些分析条件难以应用于MS检测。使用VN-50 2D进行分析,不需要添加离子对试剂,也无需向流动相中添加高浓度的盐。可以在简单的流动相条件下进行寡核苷酸的分离。
Sample : 1 µL
Synthesized oligo-DNA 62mer (crude) 2.8 mg/mL (in H2O)
CATGAGAAGTATGACAACAGCCCCACACCGGCTGTTGTCATACTTCTCATGGTTCTTCGGAA
Column : Shodex HILICpak VN-50 2D (2.0 mm I.D. x 150 mm) Eluent : (A); 50 mM HCOONH4 aq./(B); CH3CN Linear gradient ; (B %) 60 % (0 to 10min), 60 % to 50 % (10 to 25min), 60 % (25.01 to 30min) Flow rate : 0.2 mL/min Detector : UV (260 nm) (small cell volume) Column temp. : 40 ℃