作为外泌体(EV)的分析实例,细胞培养上清液的EV制备过程,使用聚合物基质水溶性SEC(GFC)色谱柱OHpak SB-806 HQ和各种检测器配合进行分析。UV 280 nm对于所有培养的不纯物质,荧光Ex 280 nm / Em 348 nm主要对于蛋白质(Trp残基做标准),MALS光散射检测器(LS)对于纳米粒子具有高灵敏度。另外MALS还能推得目标的RMS(惯性旋转半径)值。8分钟左右可见EV作为目标成分和培养来的不纯物质的分离。UV和荧光检测器可以把握纯化过程的进展及效果,但是其对于大部分为脂质膜构成,含有微量蛋白质和核酸的EV灵敏度很低,特别是纯化初期,LS是更为有效的EV追迹手段。 SB-806 HQ拥有足够的孔径来容纳和分离EV的纳米级粒子,是适用于生物制品的高性能水溶性SEC(GFC)色谱柱。和多种检测器配合,可以用于复杂的生物纳米靶制备过程的综合分析。
EV制备方法
(1) 浓缩步骤: 市售离心超滤膜 100 kDa (40倍浓缩)
(2) 亲和步骤: 市售亲和纯化试剂盒 (10倍浓缩相当)
样品制备由昭和电工材料株式会社协助
Sample :
1. Cell culture supernatant 50 μL inj.
2. Concentrate 50 μL inj.
3. Crude product 15 μL inj.
Column : Shodex OHpak SB-806 HQ (8.0 mm I.D. x 300 mm) Eluent : PBS (-) Flow rate : 1.0 mL/min Detector : UV (280 nm) Fluorescence (Ex.280 nm, Em.348 nm) MALS (DAWN8+ produced by Wyatt Technology Corp.) Column temp. : 25 ℃
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应用实例
- 样品负荷量 (KW-803)
- 流速的影响 (KW-802.5, KW-803)
- 标准蛋白质 (1) (KW-802.5)
- 标准蛋白质 (2) (KW-802.5 和 KW-803)
- 标准蛋白质 (14) (KW-802.5)
- 标准蛋白质 (15) (KW-803)
- 标准蛋白质 (16) (KW-804)
- 标准蛋白质 (18) (KW-803)
- 标准蛋白质 (19) (KW-804)
- 标准蛋白质 (23) (GF-510 HQ)
- 标准蛋白质 (24) (KW402.5-4F)
- 标准蛋白质 (25) (KW403-4F)
- 标准蛋白质 (26) (KW404-4F)
- 标准蛋白质 (27) (KW405-4F)
- 蛋白质回收率 (GF-310 HQ 和 GS-320 HQ)
- 蛋白质回收率 (KW-802.5 和 KW-803)
- 蛋白质回收率 (KW-803)
- 人血清蛋白 (3) (KW-803)
- BSA二聚体和三聚体
- 粗蛋白 (鸡蛋) (1) (KW-803)
- 天然脂肪氧化酶
- 天然过氧化氢酶
- 天然己糖激酶
- 人血清 (1) (SB-802 HQ)
- 人 IgG的胰蛋白消化酶
- 蛋白质混合物的色谱比较
- KW402.5-4F 与 KW-802.5的比较
- 蛋白质的回收率 (KW402.5-4F, KW403-4F)
- 人体血清
- 酸奶中的乳清蛋白 (KW403-4F + KW402.5-4F)
- 血凝素蛋白
- 肽分析 (SEC)
- PEG化糜蛋白酶 (KW-802.5)
- PEG化天冬酰胺酶的SEC分析 (SB-806 HQ)
- 人 IgM (2)
- 多聚赖氨酸
- 抗生物素蛋白 (2)
- α1 酸性糖蛋白
- 明胶分析 (SB-806M HQ)
- 根据日本药典标准分析甘精胰岛素 (KW-802.5)
- 根据日本药典标准分析人体胰岛素 (KW-802.5)
- 根据日本药典标准分析冬门胰岛素中的高分子不纯物 (KW-802.5)
- 根据USP-NF GENERAL CHAPTERS「胰岛素的物理化学分析流程」标准进行高分子蛋白质的分析 (KW-802.5)
- 标准蛋白质的SEC分离比较
- 多克隆抗体的SEC分离比较
- 单克隆抗体的SEC分离比较
- BSA低聚体分离比较 (LW-803, KW-803)
- 通过木瓜蛋白酶的消化监测人类单克隆IgG的分解过程 (LW-803)
- 血清脂蛋白分析 (KW-804)
- LW-403 4D和LW-803对标准蛋白质的分离比较
- 通过样品进样次数进行耐久性测试 (LW-403 4D)
- 根据USP-NF标准分析促红细胞生成素 (LW-803)
- 常规设备和半微量设备分析蛋白质的比较 (LW-403 4D)
- 常规设备和半微量设备分析IgG的比较 (LW-403 4D)
- B型肝炎病毒样颗粒(HBsAg VLP)的离子尺寸分布测定 (KW405-4F)
- 血蓝蛋白的分析 (KW405-4F)
- 根据EP标准分析生长激素 (LW-803)
- 利妥昔单抗的SEC分析 (LW-803)
- 诺如病毒样颗粒(VLP)的SEC/MALS分析 (SB-805 HQ)
- 胸腺肽α1的分析 (KW-802.5)
- 补充剂中蛋白聚糖的分析 (SB-806M HQ)
- 根据USP-NF GENERAL CHAPTERS <209> 低分子肝素的分子量测定 (KW-803+KW-802.5)