Shinoセンパーイ。ピーク高さの再現性がないんです。

(図1を見て)あら、1回目に比べて2回目は全体にピークが小さくなっているわね。4回目には少しピークが出てきているけど、3回目には全くピークが出ていないわ。これはひどいわね。

標準サンプルなのに、注入する度に全然ピークの大きさが違うんですよ。RI検出器が壊れたのかしら。

検出器じゃないと思うわ。だって、アラームランプが灯いていないでしょ。あなたのことだから、注入量を間違えたんじゃない？

そんな筈はないわ。インジェクターの20 μLループ分だけ注入しているんですもの。

おかしいわねぇ。サンプルが変性しちゃったのかしら。何を測定しているの？

どれどれ、見せてごらん。

あ！！　センパイ、見てください。　

ウーン、これは検出器じゃないね。もし検出器が壊れたのなら、3回目でピークが出なくなった後に、4回目で回復したりはしないからね。第一、ベースラインはきれいに描けているしね。たぶん、原因はインジェクターだな。

インジェクターですかぁ？？

インジェクターが壊れていて、注入量が毎回違うのだとしたら？

それなら納得できるわ。

わたしは納得できません。注入量が違うだけならクロマトグラムは相似形になるだけでしょ。3回と4回目に出ているマイナスピークの説明がつかないわ。

このマイナスピークは、空気だと思うわ。

多分そうだろうね。まず、インジェクターをチェックしてみよう。(インジェクターを分解しながら)これがローターシールだよ。やっぱり思った通りだ。

えぇ？！　どこが悪いんですかぁ？

新しいローターシールを持ってきてごらん。比べてみよう。(図2参照)

あら、古い方はここに線が付いているわ。この線が原因ですか？

そうだよ。結晶化したサンプルがローターシールを傷つけて、出来た溝なんだ。本来ならサンプルはループの中に入る筈なのに、この溝を通って廃液側に漏れてしまったんだね。

溝が深くなったから、全部廃液側に流れてしまったというわけですね。それにしても急に溝が出来るわけじゃないですよね。今まではどうだったの？　ピークの再現性はちゃんとあったの？

少々のばらつきはありましたけど････あんまり気にしても仕方ないでしょ。

困った人ねぇ。

さて、いい機会だからサンプル注入の方法を復習しておこうね。基本は？

注入したいサンプル量のループを取り付けます。20 μLのループの場合なら注射筒には100 μL用を選んで、サンプルを少なくとも60 μLは吸引します。そしてゆっくり注入します。

注射針はインジェクター専用の規格のものを使用します。先が平らなのや尖ったのがありますものね。

OK。それでは、注入するときの動作は？

まず、INJECTからLOADに切り替えてから注射筒を刺し込みます。

あら、それは間違いよ。INJECTの状態で注射筒を刺し込んで、すぐにLAODに切り替えます。サンプル液をループに注入した後も注射筒は抜かずに、ここがポイントよ。カチンとINJECTに切り替えて注入完了です。

え～、本当にその順番じゃないとダメなんですか？

LOADしてから注射筒を差し込んでも大丈夫なケースもあるけれど、いちいち区別して憶えるのは大変だろう？原則はShinoチャンのやり方だよ。

でも、注射筒を刺し込んだままで切り替えると、針先でローターシールを傷つけるような気がしますけど。

針先は直接、ローターシールには触れていないんから、大丈夫。それよりも、少なくともILOADからINJECTに戻すときはサンプルループに空気が入らないように、注射筒をインジェクターに差し込んだままの方がいいだろうね。それに、始めにINJECTの状態で注射筒を差し込む時も空気が入る可能性があるから、少しだけサンプルを押しだした後でLOADに切り替える方がいいね。

でもどうすればローターシールに傷を付けるのを防げるのかしら。

サンプルを注入した後、注射筒を抜くと空気に触れるだろう！？Needle Portに残っていたサンプルが、空気に触れて結晶化するとこれがローターシールを傷つけることになるんだよね。結晶化しやすいサンプルの場合は、注入毎に、インジェクターを洗浄した方がいいね。

注入毎にインジェクターを洗浄するのは大変ですね。私は定期的にローターシールを交換する方がいいわ。

ゴーストピークの原因にもなるから、注入毎にインジェクターを洗浄するほうがいいんだけどなぁ。

まぁ、いずれにせよ、ローターシールを交換するときには、ローターシールの種類にも気をつけるんだよ。使用する溶離液によって、耐溶媒性や、耐アルカリ性のあるローターシールを使い分けてくれよ。

はーい、ありがとうございました。