目 录 :
1.色谱柱各部分名称2. 色谱柱的安装
3. 样品配制
4. 流动相配制
5. 色谱柱清洗方法
6. 色谱柱的保存
7. 色谱柱的检定方法
8. 色谱柱的废弃方法
9. 其他注意事项
2. 色谱柱的安装
(1) 安装色谱柱前请先将设备中的流路充分洗净，完全置换成流动相。另外，请切换阀清洗并置换进样器的流路（进样环）。置换不互溶或溶解性低的溶剂时，先使置换为双方溶剂都能互溶的溶剂，再置换成使用溶剂。
（例1）从氯仿置换成水的时候，先置换为甲醇，再置换成水。
（例2）从高浓度缓冲溶液（或盐的水溶液）置换成水/乙腈的时候，先置换为水，再置换成水/乙腈。
| 注意 | 色谱柱不能使用的溶剂在流路中残留可能会造成色谱柱的劣化。 |
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| 注意 | 流动相组成发生显著变化，可能造成泵、管路中的污垢脱落，可能会造成色谱柱的劣化。 |
(3) 请一边按住管路一边拧紧色谱柱的末端接头，防止管路和末端接头中产生空隙。空隙会造成样品的扩散，导致色谱峰变宽。
(4) 将流速设置为小于正常流速的一半，然后开始送液。 在升温使用色谱柱时，以低流送液直到达到设定温度，然后逐渐将流速增加到所需流速。
| 警告 | 请检查溶剂是否泄露。否则可能会造成漏电、腐蚀或化学损坏。 |
| 注意 | 色谱柱连接入设备时，请注意不要使气泡进入色谱柱，否则可能造成色谱柱劣化。 |
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| 注意 | 当连接色谱柱或从停止送液的状态开始送液时，以小于正常流速一半的流速送液，压力突然升高可能会使色谱柱劣化。 |
| 注意 | 升温使用色谱柱后，将流速降低至正常流速的一半以下并继续送液，柱温恢复至室温，然后停泵。 否则洗脱液冷却时发生收缩，在色谱柱内形成空隙可能导致色谱柱劣化。 |
3. 样品配制
(1) 尽量使用流动相溶解和稀释样品。 如果难以溶解在流动相中，请尽量和流动相组成接近。 对于梯度洗脱，建议使用初始流动相配制样品。
(2) 为了防止由于颗粒物（不溶物）的堵塞导致色谱柱变差，劣化或性能变差，请使用滤膜（0.45μm）过滤样品。
(3) 为了保护分析柱，建议使用保护柱。
| 参考 | 保护柱可保持分析柱的性能，并没有提高分离性能的作用。 |
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4. 流动相配制
(1) 流动相请充分脱气防止有气泡。
(2) 流动相中含有不溶的杂质可能会导致色谱柱性能下降和色谱图噪声，因此请使用滤膜（0.45μm）过滤流动相。
(3) 确认色谱柱的储存溶剂，置换不互溶或溶解性低的溶剂时，先置换成双方溶剂都能互溶的溶剂，再置换成使用溶剂。
(4) 置换流动相时，请使用通常流速一半以下的流速送液。
(5) 进行梯度洗脱时，由于流动相组成的变化，色谱柱压力可能会超过梯度洗脱过程中的最大使用压力。 请调整流速和色谱柱温度，以免超出最大使用压力。
| 注意 | 使用水时，请使用超纯水装置新配制的水或者刚开封的HPLC级蒸馏水。使用有机溶剂时，请使用HPLC级以上的试剂，开封长时间的有机溶剂可能有性质改变、吸湿、污染的问题，请不要使用。 |
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| 注意 | 请勿使用已长时间保存的流动相，组成的变化可能导致洗脱行为的变化和色谱柱的劣化。 |
| 注意 | 如果使用腐蚀性较强的盐（例如氯化钠），请在分析后将其洗净，以免盐残留在设备或色谱柱上，设备和色谱柱可能会生锈。 |
| 参考 | 建议使用在线脱气机。 |
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| 参考 | 请设置泵的报警压力，以避免超过最大可用压力。 |
5. 色谱柱清洗方法
流路或者样品中有不溶物质或者吸附性物质残留在色谱柱内，可能会影响色谱柱的洗脱及压力的变化，这种情况清洗色谱柱可能有改善效果。使用保护柱时，请先去除保护柱进行检测，如果效果改善了，则可能是保护柱的原因，请清洗保护柱。
如果去除了保护柱仍然没有改善，请分别清洗保护柱和分析柱，请注意把保护柱和分析柱分开清洗。清洗色谱柱时，请不要连接检测器，流动相从色谱柱流出后直接流入废液缸即可。
(1) 如果不溶物堵在色谱柱入口，可以逆接色谱柱并以小于正常流速一半的流速通流动相来将其除去。
(2) 其他的清洗方法请参考各产品的使用说明书。
6. 色谱柱的保存
置换成出厂时的储存溶剂，从装置中卸下色谱柱并拧紧两端堵头，在温度变化小的阴暗处储存。
| 注意 | 色谱柱内绝对不能干燥，否则可能导致色谱柱劣化。 |
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7. 色谱柱的检定方法
检定条件请参考各产品包装盒中的出厂报告(Certificate of Analysis)。理论塔板数(N)和不对称系数(Fas)请通过如下方法计算。
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