糖鎖解析は精製されたタンパク質であっても含まれる糖鎖は不均一なこと、糖鎖特有の結合異性体や分岐構造を識別する必要性があることなど多くの課題があります。このような課題解決にHPLCは有効です。アフィニティモードによる分離、更にヒリックモードによる二次元分離により様々な糖鎖が 分離定量されています。下記データは2-アミノ安息香酸(2AA)で誘導体化した糖鎖をポリマー系アミノカラムAsahipak NH2P-40 2Dを用いてヒリックモードで分離しESI-TOF-MSで糖鎖の同定を行った例をご紹介します。
※Asahipak NH2P-40 2Dは販売を終了しております。こちらのデータにご興味のある方はお問い合わせください。


Sample : 2 μL
Human IgG (1 μg protein)
2AA-labeled N-Glycan

Column       : Shodex Asahipak NH2P-40 2D (2.0 mm I.D. x 150 mm)
Eluent       : (A); 95 % MeCN/0.1 % Formic acid
               (B); 5 % MeCN/0.1 % Formic acid
               Linear gradient;
               (B %) 30 % (0 - 2.5 min), 30 - 95 % (2.5 - 20 min)
Flow rate    : 0.2 mL/min
Detector     : ESI-TOF MS 
               (Polarity : Negative, Full MS range : 2000, CDL temp.: 190 ℃, 
               Detector voltage: 1.7 kV, Neuburising gas: 1.5 L/min)
Column temp. : 45 ℃

近畿大学薬学部 木下充弘先生ご提供