次世代医薬品として期待されている核酸医薬の開発や品質管理において、オリゴヌクレオチドの分析では従来イオンペア逆相モードが多用されていますが、イオンペア剤が装置に残留しやすいという問題があります。ここではポリマー系HILICモード用カラム HILICpak VN-50 2Dを用いて合成ホスホロチオエート型オリゴDNA 20merの未精製品についてHPLC測定を行いました。ホスホロチオエート化されたオリゴヌクレオチドは通常のオリゴ核酸よりも安定性が向上するため、核酸医薬によく使われます。HILICモードを用いた本条件ではイオンペア剤が不要で、50 mMギ酸アンモニウム水溶液(pH9.5)とアセトニトリルのグラジエント溶出により良好なオリゴマー分離が得られました。


Sample : 1 µL
Synthesized phosphothioated oligo-DNA 20mer (crude)
(A*T*A*C*C*G*A*T*T*A*A*G*C*G*A*A*G*T*T*T ; * means phosphorothioated position)
1.0 mg/mL (in H₂O)

Column       : Shodex HILICpak VN-50 2D (2.0 mm I.D. x 150 mm)
Eluent       : (A)50 mM HCOONH4 aq. (pH9.5)/(B) CH3CN
               Linear gradient ;
               (B %) 64 to 58 % (0 to 10 min), 58 % (10 to 15 min), 
                    58 to 64 % (15 to 15.01 min), 64 % (15.01 to 20 min)
Flow rate    : 0.25 mL/min
Detector     : UV (260 nm) (small cell volume)
Column temp. : 40 ℃