溶離液pHの影響 (ODP-50 5D)

従来シリカ系逆相クロマトグラフィー用カラムによるペプチドの分析は多くの場合pH2～7の溶離液条件で行われてきましたがポリマー系逆相クロマトグラフィー用カラムAsahipak ODPカラムは、アルカリ性溶離液も使用できるため分離条件を広く選択できるようになりました。pH2.3での分析は通常、タンパク質やペプチドの分析で多用されているTFA系 (酸性条件)での分析例です。この条件ではLeu-EnkephalinとLeu-Trp-Metは保持が強いにも係わらず選択性が小さく不十分なクロマトグラムになっています。一方、アルカリ性溶離液(pH10)を用いると両者の選択性が大きくなるとともに短時間でバランスのよいクロマトグラムが得られています。さらにODPカラムではアルカリ性で高い理論段数が得られている点も大きな特長です。
参照 : 酸性とアルカリ性溶離液でのオリゴペプチド分析 (ODP-50 6D)

Sample:

  1. 1.Glu-Gly-Phe
  2. 2.Met-Enkephalin
  3. 3.Leu-Enkephalin
  4. 4.Leu-Trp-Met
スクロールできます
No. Theoretical plate number
pH2.3 pH3.0 pH6.7 pH10
1 6100 1100 3800 -
2 7400 1100 4700 5700
3 7600   600 3800 6700
4 6100   500 2400 8000
Column
：Shodex Asahipak ODP-50 6D (6.0 mm I.D. x 150 mm)
Eluent
：Solution/CH3CN=85/15
(pH2.3) 0.05 % TFA aq.
(pH3.0) 50 mM Acetic acid aq.
(pH6.7) 50 mM Ammonium acetare buffer
(pH10.0) 50 mM Ammonium acetare buffer
Flow rate
：1.0 mL/min
Detector
：UV (220 nm)
Column temp.
：30 ℃

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