诺如病毒样颗粒VLP的SEC/MALS分析 (2) (UB-50)

我们使用生物纳米产品分析纯化用水溶性SEC(GFC)色谱柱UB-50与各种检测器组合,对来自细胞培养上清的诺如病毒VLP进行了分析。
UV(280 nm)用于检测培养来源的杂质整体,MALS散射(LS)特别对纳米粒子类别的大型目标产生高灵敏度的响应。此外,通过MALS可以得到目标的旋转半径(RMS radius)的估计值。为了更直接地确认VLP的形状、大小等形成情况,我们还使用了透射电子显微镜(TEM)进行了比较。
通过TEM观察可以很好地确认VLP的形成情况,而且MALS结果大约16分钟处也确认了与TEM相符的粒子大小。尽管这次使用的诺如病毒VLP样品是纯化级别的,但从RMS半径的信息中可以看出存在比正常VLP更大的粒子(如凝集体),并且从UV的分析结果中也暗示了低分子领域仍然残留有生物源性杂质。
UB-50不仅能够对50 nm以下的纳米产品进行分析纯化,以实现目标的分析,而且还兼顾了品质保证中非常重要的产物与生物源性杂质的分离。此外,UB-50考虑到了实验室规模的制备应用,通过采用26 µm的单分散粒子,实现了在分析生物源成分的高负荷工作流程中仍能保持低压。同时,UB-50具备高耐碱性,可以用碱清洗,从而提高再现性和减少拖尾效应。

进行微量、精密分析时,可以参考水溶性SEC(GFC)色谱柱OHpak SB-805 HQ的应用实例

 

Sample: 15 µL

Norovirus VLP purification grade

  1.  
Chromatogram of Norovirus VLP
Column
Shodex UB-50 (8.0 mm I.D. x 300 mm)
Eluent
PBS (-)
Flow rate
0.6 mL/min
Detector
UV (280 nm) (small cell volume), MALS (Multi angle light scattering)
Column temp.
Room temp.

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