外泌体的SEC/MALS分析 (2) (UB-100)

我们使用生物纳米产品分析纯化用水溶性SEC(GFC)色谱柱UB-100与各种检测器组合,对来自人血浆的外泌体(EV)进行了分析。UV(280 nm)用于检测生物源性杂质整体,荧光(FL; Ex 280 nm / Em 348 nm)主要用于检测蛋白质(以Trp残基为指标),MALS散射(LS)特别对纳米粒子类别的大型目标产生高灵敏度的响应。此外,通过MALS可以得到目标的旋转半径(RMS radius)的估计值。
根据MALS的信息,大约13分钟附近是以外泌体(EV)为主要组分的区域,并且从RMS半径的信息可以推测分子大小存在分布。本次分析使用的来自人血浆的EV样品虽然是纯化级别的,但从UV、FL的分析结果来看,在EV区域之外也检测到了峰值,可以推测仍含有杂质。
UB-100不仅能够对以外泌体(EV)为主的50 nm以上的纳米产品进行分析纯化,以实现目标的分析,而且还兼顾了品质保证中非常重要的产物与生物源性杂质的分离。此外,UB-100考虑到了实验室规模的制备应用,通过采用27 µm的单分散粒子,实现了在分析生物源成分的高负荷工作流程中仍能保持低压。同时,UB-100具备高耐碱性,可以用碱清洗,从而提高再现性和减少拖尾效应。

进行微量、精密分析时,可以参考水溶性SEC(GFC)色谱柱OHpak SB-806 HQ的应用实例

Sample: 15 µL
Exosome from human plasma purification grade

  1.  
Chromtogram of Exosome
Column
Shodex UB-100 (8.0 mm I.D. x 300 mm)
Eluent
PBS (-)
Flow rate
0.6 mL/min
Detector
UV (280 nm) (small cell volume), Fluorescence (Ex. 280 nm, Em. 348 nm), MALS (Multi angle light scattering)
Column temp.
Room temp.

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