ピーク高さの再現性がない時は・・・　ﾆｭｰｽﾚﾀｰNo.27

後輩Ｓｈｉｎｏセンパーイ。ピーク高さの再現性がないんです。
Shino (図1を見て)あら、1回目に比べて2回目は全体にピークが小さくなっているわね。4回目には少しピークが出てきているけど、3回目には全くピークが出ていないわ。これはひどいわね。


(図1)

後輩標準サンプルなのに、注入する度に全然ピークの大きさが違うんですよ。RI検出器が壊れたのかしら。
Shino検出器じゃないと思うわ。だって、アラームランプが灯いていないでしょ。あなたのことだから、注入量を間違えたんじゃない？
後輩 そんな筈はないわ。インジェクターの20μLループ分だけ注入しているんですもの。
Shinoおかしいわねぇ。サンプルが変性しちゃったのかしら。何を測定しているの？
先輩どれどれ、見せてごらん。
後輩あ！！　センパイ、見てください。　
先輩 ウーン、これは検出器じゃないね。もし検出器が壊れたのなら、3回目でピークが出なくなった後に、4回目で回復したりはしないからね。第一、ベースラインはきれいに描けているしね。たぶん、原因はインジェクターだな。
Shino、後輩 インジェクタですかぁ？？
先輩 インジェクタが壊れていて、注入量が毎回違うのだとしたら？
Shinoそれなら納得できるわ。
後輩 わたしは納得できません。注入量が違うだけならクロマトグラムは相似形になるだけでしょ。3回と4回目に出ているマイナスピークの説明がつかないわ。
Shinoこのマイナスピークは、空気だと思うわ。
先輩 多分そうだろうね。まず、インジェクタをチェックしてみよう。(インジェクタを分解しながら)これがローターシールだよ。やっぱり思った通りだ。
後輩えぇ？！　どこが悪いんですかぁ？
先輩 新しいローターシールを持ってきてごらん。比べてみよう。(図2参照)


(図2)

Shinoあら、古い方はここに線が付いているわ。この線が原因ですか？
先輩そうだよ。結晶化したサンプルがローターシールを傷つけて、出来た溝なんだ。本来ならサンプルはループの中に入る筈なのに、この溝を通って廃液側に漏れてしまったんだね。
Shino溝が深くなったから、全部廃液側に流れてしまったというわけですね。それにしても急に溝が出来るわけじゃないですよね。今まではどうだったの？　ピークの再現性はちゃんとあったの？
後輩少々のばらつきはありましたけど････あんまり気にしても仕方ないでしょ。
Shino困った人ねぇ。
先輩さて、いい機会だからサンプル注入の方法を復習しておこうね。基本は？
Shino 注入したいサンプル量のループを取り付けます。20μLのループの場合なら注射筒には100μL用を選んで、サンプルを少なくとも60μLは吸引します。そしてゆっくり注入します。
後輩 注射針はインジェクタ専用の規格のものを使用します。先が平らなのや尖ったのがありますものね。
先輩 OK。それでは、注入するときの動作は？
後輩まず、INJECTからLOADに切り替えてから注射筒を刺し込みます。
Shinoあら、それは間違いよ。INJECTの状態で注射筒を刺し込んで、すぐにLAODに切り替えます。サンプル液をループに注入した後も注射筒は抜かずに、ここがポイントよ。カチンとINJECTに切り替えて注入完了です。
後輩え〜、本当にその順番じゃないとダメなんですか？
先輩LOADしてから注射筒を差し込んでも大丈夫なケースもあるけれど、いちいち区別して憶えるのは大変だろう？　原則はＳｈｉｎｏチャンのやり方だよ。
後輩でも、注射筒を刺し込んだままで切り替えると、針先でローターシールを傷つけるような気がしますけど。
先輩針先は直接、ローターシールには触れていないんから、大丈夫。それよりも、少なくともILOADからINJECTに戻すときはサンプルループに空気が入らないように、注射筒をインジェクタに差し込んだままの方がいいだろうね。それに、始めにINJECTの状態で注射筒を差し込む時も空気が入る可能性があるから、少しだけサンプルを押しだした後でLOADに切り替える方がいいね。
Shinoでもどうすればローターシールに傷を付けるのを防げるのかしら。
先輩サンプルを注入した後、注射筒を抜くと空気に触れるだろう！？Needle Portに残っていたサンプルが、空気に触れて結晶化するとこれがローターシールを傷つけることになるんだよね。結晶化しやすいサンプルの場合は、注入毎に、インジェクタを洗浄した方がいいね。
後輩 注入毎にインジェクタを洗浄するのは大変ですね。私は定期的にローターシールを交換する方がいいわ。
Shino ゴーストピークの原因にもなるから、注入毎にインジェクタを洗浄するほうがいいんだけどなぁ。
先輩まぁ、いずれにせよ、ローターシールを交換するときには、ローターシールの種類にも気をつけるんだよ。使用する溶離液によって、耐溶媒性や、耐アルカリ性のあるローターシールを使い分けてくれよ。
Shino、後輩はーい、ありがとうございました。

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