溶離液pHの影響　(SP-825)

強陽イオン交換カラムIEC SP-825を用いたタンパク質の分離におけるpHの影響を調べました。　溶離液pHが7.0と8.0の場合は、5種のタンパク質が良く分離されています。　リボヌクレアーゼ Aの保持時間は、pHが下がる程大きくなり、pH6.0以下ではαキモトリプシノーゲンAの後に溶出するようになります。　pH6.0ではリボヌクレアーゼAとαキモトリプシノーゲンAの分離が不充分になります。　pH4.0と5.0ではミオグロビンがシャープに溶出していません。



Sample :
1. Myoglobin, 2. Ribonuclease A, 3. α Chymotrypsinogen A, 4. Cytochrome c, 5. Lysozyme

Column    : Shodex IEC SP-825 (8.0mmID*75mm)
Eluent    : (A); 20mM Sodium formate buffer(pH4.0)
                 20mM Sodium malonate buffer(pH5.0 and 6.0)
                 20mM Sodium phosphate buffer(pH7.0)
                 20mM HEPES(pH8.0)
            (B); (A) + 0.5M NaCl
            Linear gradient: 0min to 20min, (A) to (B)
Flow rate : 1.0mL/min