溶離液pHの影響 (ODP)

従来シリカ系逆相クロマトグラフィ用カラムによるペプチドの分析は多くの場合pH2〜7の溶離液条件で行われてきましたが、ポリマー系逆相クロマトグラフィ用カラムAsahipak ODPカラムは、アルカリ性溶離液も使用できるため、分離条件を広く選択できるようになりました。　pH2.3での分析は通常、タンパク質やペプチドの分析で多用されているTFA系 (酸性条件)での分析例です。　この条件では、Leu-EnkephalinとLeu-Trp-Metは保持が強いにも係わらず選択性が小さく不十分なクロマトグラムになっています。　これに対してアルカリ性溶離液(pH10)を用いると両者の選択性が大きくなるとともに短時間でバランスのよいクロマトグラムが得られています。　さらにODPカラムでは、アルカリ性で高い理論段数が得られている点も大きな特長です。
参照 : 酸性とアルカリ性溶離液でのオリゴペプチド


Sample :
1. Glu-Gly-Phe
2. Met-Enkephalin
3. Leu-Enkephalin
4. Leu-Trp-Met

理論段数

No.	pH2.3	pH3	pH6.7	pH10
1	6100	1100	3800	-
2	7400	1100	4700	5700
3	7600	600	3800	6700
4	6100	500	2400	8000

Column       : Shodex Asahipak ODP-50 6D (6.0mmID*150mm)
Eluent       : buffer/CH3CN=85/15
               (pH2.3)  0.05% TFA aq.
               (pH3.0)  50mM Acetic acid aq.
               (pH6.7)  50mM Ammonium acetare buffer
               (pH10.0) 50mM Ammonium acetare buffer
Flow rate    : 1.0mL/min
Detector     : UV(220nm)
Column temp. : 30℃