カップリング例 (1) (NHS)

BIOACT gel NHSのNHS活性エステル基の濃度は、冷水に置換して吸引ろ取した直後の状態で、約0.1mmol/g wet gelです。　タンパク質、または一級アミノ基(-NH₂)を持つ水溶性高分子のリガンドに適しています。　一級アミノ基を持つ脂溶性リガンドにも適用可能です。固定化反応には、ジクロロメタン(CH₂Cl₂)、テトラヒドロフラン(THF)、N,N-ジメチルホルムアミド(DMF)などを溶媒とし、塩基としてN-メチルモルホリン(NMM)、 ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)などの三級アミンを適宜加えてください。

(リガンドのカップリング例)
�@　タンパク質、または一級アミノ基を持つ水溶性高分子のリガンド(0.15g)をNaHCO3水溶液に溶解します。
�A　2M Na2SO4水溶液を�@の溶液に少しずつ加え、全体が均一になるように振り混ぜます。
�B　BIOACT gel NHS(25mLの*IPA懸濁液)をグラスフィルタ(G4)で吸引ろ取し、10℃以下の精製水で洗浄します。
�C　�Bのゲルを�Aの溶液へ加え、水浴中で超音波を当てながら緩やかに振り混ぜて、ゲル全体を溶液に
    よく馴染ませます。
�D　4〜30℃で2h静置します。
�E　もう一度、水浴中で超音波を当てます。
�F　冷蔵庫で一晩静置します。
�G　�Fのゲルをグラスフィルタで吸引ろ取し、精製水、1M NaCl水溶液、精製水で順次洗浄します。
�H　�Gのグラスフィルタ上のゲルに、吸引を止めた状態で1M Tris-HCl緩衝液(pH8.0)を加え、室温で30min放置して
    馴染ませます。
�I　吸引を再開し、精製水で洗浄します。
�J　�Iのゲルをビーカーに移します。
�K　�Jのゲルに精製水を加え、よく分散させてから静置し、数分後に上澄み(浮遊物)をデカンテーションで除きます。
�L　�Kの操作を、浮遊物がなくなるまで繰り返します。
�M　�Lのゲルを吸引ろ取し、湿潤状態での質量を記録した後、
    「10mM リン酸緩衝液(pH7.4) + 0.1M NaCl + 0.02% NaN3」に浸して4℃で保存します。
*IPA : Isopropyl alcohol